高中各科目的學(xué)習(xí)對(duì)同學(xué)們提高綜合成績非常重要,大家一定要認(rèn)真掌握,小編為大家整理了高中生物實(shí)驗(yàn)DNA的粗提取和鑒定實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意的問題,希望同學(xué)們學(xué)業(yè)有成!
1.盛放雞血細(xì)胞液的容器,最好是塑料容器。因?yàn)殡u血細(xì)胞破碎后釋放出的DNA,容易被玻璃容器吸附,細(xì)胞內(nèi)DNA的含量比較少,如果被玻璃窖吸附卻一部分,提取的DNA就會(huì)更少。因此,實(shí)驗(yàn)過程中最好使用塑料的燒杯和試管,這樣可以減少提取過程中DNA的損失。
2.獲取較純凈的DNA的關(guān)鍵步驟。
⑴充分?jǐn)嚢桦u血細(xì)胞液。DNA存在于雞血細(xì)胞的細(xì)胞核中。將雞血細(xì)胞液與蒸餾水混合后,必須用玻璃棒沿一個(gè)方向快速攪拌,使雞血細(xì)胞加速破裂,并釋放出DNA。
⑵沉淀DNA時(shí)必須用冷酒精。實(shí)驗(yàn)前必須準(zhǔn)備好大量的體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精,并在冰箱中至少存放24h。
⑶正確攪拌含有懸浮物的溶液。實(shí)驗(yàn)步驟3、5、7都需要用玻璃棒攪拌。在進(jìn)行步驟3、5時(shí),玻璃棒不要直接接觸燒杯底部,而且攪拌要輕緩,以便獲得較完整的DNA分子。進(jìn)行步驟7時(shí),要將玻璃棒插入燒杯中溶液的中間,用手緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)5min~10min。
3.本實(shí)驗(yàn)中鑒定DNA的方法為二苯胺法。如果在沒有二苯胺的情況下也可以用以下幾種方法。
⑴配制染色劑。用蒸餾水配制0.05%的溴化乙錠(EB)溶液。
⑵將玻璃棒上纏繞的白色絮狀物抹于蠟紙上,再滴1滴EB溶液染色。
⑶將蠟紙放在紫外燈(260nm)下照射(暗室中),可見橙紅色的熒光(DNA的紫外吸收高峰在260nm處)。
4.典例解析
1.下列關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”的實(shí)驗(yàn)原理中,說法錯(cuò)誤的是
A.DNA在氯化鈉溶液中的溶解度隨溶液濃度的變化而改變
B.利用DNA不溶于酒精的性質(zhì),可除去細(xì)胞中溶于酒精的物質(zhì)而得到較純的DNA
C.DNA是大分子有機(jī)物,不溶于水而溶于某些有機(jī)溶劑
D.DNA溶液中加入二苯胺試劑經(jīng)沸水浴后會(huì)出現(xiàn)藍(lán)色反應(yīng)
解析:該實(shí)驗(yàn)依據(jù)的原理是A、B、D,DNA不溶于酒精(屬有機(jī)溶劑),C說法錯(cuò)誤。
答案:C
2.下列關(guān)于實(shí)驗(yàn)操作的說法中,有誤的是( )
A.該實(shí)驗(yàn)中有兩次加入蒸餾水,均是為了析出DNA
B.該實(shí)驗(yàn)學(xué)生操作中多次用到攪拌,除最后一步未強(qiáng)調(diào)方向外,其余均要求單向攪拌
C.該實(shí)驗(yàn)中有3次過濾,過濾時(shí)使用紗布層數(shù)與需用濾液或黏稠物有關(guān)
D.實(shí)驗(yàn)三次加入NaCl溶液,無論濃度是2mol/L,還是0.015mol/L,均是為了溶解DNA
解析:對(duì)照比較表可知,除A說法有誤外,其余各項(xiàng)均正確。兩次加蒸餾水,第一次是為了使細(xì)胞吸水破裂釋放出核物質(zhì)(DNA),第二次是為了降低NaCl溶液的濃度從而析出DNA。
答案:A
3.填寫本實(shí)驗(yàn)操作過程中所用試劑。
⑴提取雞血細(xì)胞中核物質(zhì): ;
⑵溶解核內(nèi)DNA: ;
⑶析出溶液中的DNA: ;
⑷DNA粘稠物的再溶解: ;
⑸提取雜質(zhì)較少的DNA白色乳狀絲狀物: ;
⑹鑒定DNA是否存在可用試劑: 。
解析: ⑹鑒定DNA是否存在常用:二苯胺試劑沸水浴為藍(lán)色反應(yīng);也可選用甲基綠試劑,其顏色反應(yīng)為藍(lán)綠色。(其它略)
答案:⑴蒸餾水 ⑵2mol/L NaCl溶液 ⑶蒸餾水 ⑷2mol/L NaCl溶液 ⑸冷卻的體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精 ⑹二苯胺試劑或甲基綠試劑
以上就是為大家整理的高中生物實(shí)驗(yàn)DNA的粗提取和鑒定實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意的問題,希望同學(xué)們閱讀后會(huì)對(duì)自己有所幫助,祝大家閱讀愉快。
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