(1)實驗原理：

  ①土壤中存在著大量纖維素分解酶，包括真菌、細菌和放線菌等，它們可以產(chǎn)生纖維素酶。纖維素酶是一種復合酶，可以把纖維素分解為纖維二糖，進一步分解為葡萄糖使微生物加以利用，故在用纖維素作為唯一碳源的培養(yǎng)基中，纖維素分解菌能夠很好地生長，其他微生物則不能生長。

  ②在培養(yǎng)基中加入剛果紅，可與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復合物，當纖維素被分解后，紅色復合物不能形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，從而可篩選纖維素分解菌。

  (2)實驗過程：

  土壤取樣：采集土樣時，應選擇富含纖維素的環(huán)境

  ↓

  梯度稀釋：用選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)，以增加纖維素分解菌的濃度

  ↓

  梯度稀釋

  ↓

  涂布平板：將樣品涂布于含剛果紅的鑒別纖維素分解菌的固體培養(yǎng)基上

  挑選產(chǎn)生中心透明圈的菌落：產(chǎn)生纖維素酶的菌落周圍出現(xiàn)透明圈,考試技巧，從產(chǎn)生明顯的透明圈的菌落上挑取部分細菌，并接種到纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基上，在30～37℃條件下培養(yǎng)，可獲得較純的菌種。

  剛果紅染色的兩種方法的比較：

  先培養(yǎng)微生物，在加入剛果紅在到平板時加入剛果紅

  優(yōu)點顯示出的眼神反映基本上是纖維素分解菌的作用操作簡便，不存在菌落混雜問題

  缺點操作繁瑣，加入剛果紅溶液會使菌落之間發(fā)生混雜(1)由于瓊脂和土豆汁中都含有淀粉類物質(zhì)，可以使能夠產(chǎn)生淀粉酶的微生物出現(xiàn)假陽性反應

  (2)有些微生物具有降解色素的能力，長時間培養(yǎng)會降解剛果紅，從而形成明顯的透明圈，這些微生物與纖維素分解菌不易區(qū)分

  知識拓展：1.纖維素與纖維素酶

  (1)纖維素

  ①化學本質(zhì)：一種多糖。

  ②分布：棉花是自然界中纖維素含量最高的天然產(chǎn)物，此外，木材、作物秸稈等也富含纖維素。

  (2)纖維素酶

  ①習慣上，將纖維素酶分成三類：C1酶、Cx酶和β葡糖苷酶。C1酶是對纖維素最初起作用的酶，破壞纖維素鏈的結(jié)晶結(jié)構。Cx酶是作用于經(jīng)C1酶活化的纖維素、分解β-1，4-糖苷鍵的纖維素酶。β葡糖苷酶可以將纖維二糖、纖維三糖及其他低分子纖維糊精分解為葡萄糖。

  ②作用：纖維素

  纖維二糖葡萄糖

  2、為確定得到的微生物是纖維素分解菌，還需進行發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的實驗。纖維素酶的發(fā)酵方法有液體發(fā)酵和固體發(fā)酵兩種。纖維素酶的測定方法，一般是對纖維素酶分解濾紙等纖繼素后所產(chǎn)生的葡萄糖進行定量測定。

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